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猴cGMP依赖性蛋白激酶I (PRKG1)ELISA试剂盒

Product Introduction
实验原理检测指标试剂盒组成操作步骤标本要求
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被微孔中依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
英文名称 Monkey PRKG1 (Protein Kinase, cGMP Dependent Type I) ELISA Kit
中文名称 猴cGMP依赖性蛋白激酶I (PRKG1)ELISA试剂盒
货号 EK-M50061 种属 Monkey/猴
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双抗体夹心法
检测范围 灵敏度
名称 96孔配置 48孔配置 备注
微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条
标准品 0.3mL*6管 0.3mL*6管
样本稀释液 6ml 3ml
检测抗体-HRP 10ml 5ml
20×洗涤缓冲液 25ml 15ml 按说明书进行稀释
底物A 6ml 3ml
底物B 6ml 3ml
终止液 6ml 3ml
封板膜 2张 2张
说明书 1份 1份
自封袋 1个 1个

1.从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。

3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。样本不足,或者样本浓度过高,可用样本稀释液做稀释。

4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

1.血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

2.血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

3.组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

4.细胞培养上清:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

5.其他生物样本:1000×g离心20分钟,取上清即可检测。

6.样本外观:样品应清澈透明,悬浮物应离心去除。

7.样本保存:样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(6个月内检测),避免反复冻融,标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

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叶子 135-6489-5879


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