pcDNA3.2/V5-DEST空载上，CMV启动子后有ccdB表达框，所以此载体只能在DB3.1等专用的大肠杆菌中才能复制扩增，使用此载体时，请注意配套相应的DB3.1感受态。当外源基因成功插入，ccdB表达框将被置换掉，此时，重组质粒可以在DH5α等常规大肠杆菌中复制扩增。