pPIC3.5K是一个鉴定多拷贝基因插入到毕赤酵母基因组中的载体。 1. pPIC3.5K载体大小为9004 bp。 2. 在多克隆位点区域，拥有5个单一的限制性酶切位点：BamH I，Snab I，EcoR I，Avr II和Not I。 3.胞内表达。 4.载体构建时，需要包含一个ATG启动子，同时需要加入Kozak序列。 (Cavener and Stuart, 1991; Kozak, 1987; Kozak, 1990) 5. 毕赤酵母中使用HIS4基因筛选。 6.  将基因插入GS115和KM71的AOX1中，需要使用Sac I线性化质粒(GS115产生的基因型为His+ Mut+，KM71酵母产生的基因型为His+ MutS)。 7. 将基因插入GS115和KM71的HIS4中，需要使用Sal I线性化质粒(GS115产生的基因型为His+ Mut+，KM71酵母产生的基因型为His+ MutS)。 8. 将基因插入GS115的AOX1基因中，也可以使用Bgl II 限制酶线性化质粒，产生的酵母基因型为His+ MutS。